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    文摘报 2020年03月26日 星期四

    在P3实验室,新冠病毒被这样“揪出来”

    龙跃梅等 《 文摘报 》( 2020年03月26日   07 版)

        “这里是与病毒‘零距离’接触的地方,整个实验室完全密封,室内处于负压状态,我们喜欢用‘三流’来形容它,即人流、物流、气流的单向流动,确保在里面的污染物不会泄漏到外面而造成污染。”广东省第二人民医院P3实验室主任林剑国说。而他说的“这里”指的就是P3实验室(生物安全防护三级实验室)。

        实验室内的检测流程可分为5个步骤:样本进入“传递窗”—灭活处理—开盖加样和核酸提取—扩增反应判断结果—高压灭菌。

        第一步,采集的检测样本如咽拭子或肛拭子,在进入P3实验室前就得先进入一个特殊的窗口——“传递窗”,这个窗口也叫Air Lock,空气锁,顾名思义,与空气有关。这个传递窗有不能同时打开的双重门,保证传递样本时带进去的空气被隔离在双重门中,确保实验室外的环境不受污染。

        第二步,样本在水浴箱经半个小时56℃的高温灭活,使病毒蛋白不再有生理活性,失去感染、致病和繁殖能力,使实验员在对样本进行检测时相对安全,但是病毒蛋白的基因序列并没有受到影响。

        第三步,进行开盖加样和核酸提取。

        第四步,提取的核酸送到核酸检测室内,就要上仪器了。提取的核酸加入扩增试剂中,通过荧光PCR仪进行RT-PCR反应,先将提取的核酸逆转录成DNA,再以DNA为模版,对特定位点进行扩增,利用不同的温度进行变性、退火和延伸,每个循环采集荧光值,45个循环后绘制荧光曲线,用时约110分钟,实验员根据荧光曲线分析判断结果的阴性和阳性。

        第五步,实验过程产生的污物通过高压灭菌后,按相关普通医疗垃圾处理。

        任何一个环节出现问题都可能导致检测结果差错。因此,为保障检测的质量,检测结果将经历重重的比对与复核。在检测过程中,实验员始终保持谨慎的态度进行每一次测试,不错过任何一个可疑样本,针对可疑样本还会选用不同的试剂进行复核确定;其次,按照流程,每进行一批实验,均会随机插入三个以上空白对照,针对阳性样本还会进行病毒基因的测序比对,以防止“假阳性”的出现。

        在操作中,实验员面对眼前的样本,需要“一个一个地揭开盖子,进行开盖加样和核酸提取”,这无疑是与病毒的正面交锋。核酸检测的宗旨是高效、有序和安全。实验员要进入P3实验室,首先应在清洁区内穿戴中级防护服,通过缓冲间进入实验室负压工作间,在这里进行标本处理,核酸提取及检测完毕后进行空间、表面消毒,再按顺序脱下防护服,通过淋浴间更衣后,回到清洁区。这些步骤必须严格执行,一个都不能少。

        (《科技日报》3.12 龙跃梅等)

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